大鼠(shu)層粘蛋白（LN）elisa試(shi)劑盒對于樣(yang)品的要求有哪些(xie)！

檢測范(fan)圍： 96T15μg/L -400μg/L，本(ben)試劑盒僅供研究使用。

使用目的：本(ben)試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相(xiang)關液體樣本(ben)中層粘連蛋白(LN)含量。

實驗(yan)原理：本(ben)試劑(ji)盒應用(yong)雙(shuang)抗(kang)體(ti)(ti)夾心(xin)法測定標(biao)(biao)本(ben)中(zhong)大鼠層(ceng)粘連蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(LN)水平(ping)。用(yong)純化的(de)大鼠層(ceng)粘連蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(LN)抗(kang)體(ti)(ti)包被微(wei)孔(kong)板，制成(cheng)固相(xiang)抗(kang)體(ti)(ti)，往包被單抗(kang)的(de)微(wei)孔(kong)中(zhong)依次加入層(ceng)粘連蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(LN)，再與HRP 標(biao)(biao)記(ji)的(de)層(ceng)粘連蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(LN)抗(kang)體(ti)(ti)結合，形成(cheng)抗(kang)體(ti)(ti)-抗(kang)原-酶標(biao)(biao)抗(kang)體(ti)(ti)復合物(wu)，經過洗滌后加底物(wu)TMB 顯色(se)。TMB 在HRP 酶的(de)催化下(xia)轉(zhuan)化成(cheng)藍色(se)，并在酸的(de)作用(yong)下(xia)轉(zhuan)化成(cheng)zui終的(de)黃(huang)色(se)。顏色(se)的(de)深(shen)淺和(he)樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)層(ceng)粘連蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(LN)呈正相(xiang)關。用(yong)酶標(biao)(biao)儀(yi)在450nm 波長下(xia)測定吸光度（OD 值），通過標(biao)(biao)準曲線計算樣(yang)品(pin)中(zhong)大鼠層(ceng)粘連蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(LN)濃度。

標本要求：
1.
標(biao)本采集后盡(jin)早進(jin)行(xing)提(ti)(ti)取(qu)，提(ti)(ti)取(qu)按相(xiang)關文獻進(jin)行(xing)，提(ti)(ti)取(qu)后應盡(jin)快進(jin)行(xing)實(shi)驗(yan)。若不能(neng)馬上進(jin)行(xing)試(shi)驗(yan)，可將標(biao)本放于(yu)-20℃保存，但(dan)應避免反(fan)復凍融

2.
不能檢測含NaN3 的(de)樣(yang)品，因NaN3 抑制辣(la)根過氧化物酶的(de)（HRP）活性。

操作步驟：

1. 標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)的(de)(de)(de)稀(xi)(xi)(xi)釋(shi)：本(ben)試劑盒提供原(yuan)倍(bei)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)一支，用戶(hu)可(ke)按照下(xia)列圖表在小(xiao)試管中進(jin)行稀(xi)(xi)(xi)釋(shi)。400μg/L 5 號(hao)(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin) 150μl 的(de)(de)(de)原(yuan)倍(bei)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)加(jia)(jia)入150μl 標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)稀(xi)(xi)(xi)釋(shi)液(ye)200μg/L 4 號(hao)(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin) 150μl 的(de)(de)(de)5 號(hao)(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)加(jia)(jia)入150μl 標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)稀(xi)(xi)(xi)釋(shi)液(ye)100μg/L 3 號(hao)(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin) 150μl 的(de)(de)(de)4 號(hao)(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)加(jia)(jia)入150μl 標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)稀(xi)(xi)(xi)釋(shi)液(ye)50μg/L 2 號(hao)(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin) 150μl 的(de)(de)(de)3 號(hao)(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)加(jia)(jia)入150μl 標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)稀(xi)(xi)(xi)釋(shi)液(ye)25μg/L 1 號(hao)(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin) 150μl 的(de)(de)(de)2 號(hao)(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)加(jia)(jia)入150μl 標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)稀(xi)(xi)(xi)釋(shi)液(ye)

2. 加(jia)(jia)(jia)樣(yang)：分(fen)別設空白孔(kong)(kong)(kong)（空白對照孔(kong)(kong)(kong)不(bu)加(jia)(jia)(jia)樣(yang)品(pin)(pin)(pin)及酶標(biao)(biao)試劑(ji)，其(qi)余各步(bu)操(cao)作相同）、標(biao)(biao)準孔(kong)(kong)(kong)、待(dai)(dai)測樣(yang)品(pin)(pin)(pin)孔(kong)(kong)(kong)。在酶標(biao)(biao)包被(bei)板上標(biao)(biao)準品(pin)(pin)(pin)準確加(jia)(jia)(jia)樣(yang)50μl，待(dai)(dai)測樣(yang)品(pin)(pin)(pin)孔(kong)(kong)(kong)中先加(jia)(jia)(jia)樣(yang)品(pin)(pin)(pin)稀(xi)釋液40μl，然后再加(jia)(jia)(jia)待(dai)(dai)測樣(yang)品(pin)(pin)(pin)10μl（樣(yang)品(pin)(pin)(pin)zui終稀(xi)釋度為5 倍）。加(jia)(jia)(jia)樣(yang)將樣(yang)品(pin)(pin)(pin)加(jia)(jia)(jia)于酶標(biao)(biao)板孔(kong)(kong)(kong)底部，盡(jin)量(liang)不(bu)觸及孔(kong)(kong)(kong)壁，輕輕晃動混勻。

3.  溫育：用封板膜(mo)封板后(hou)置(zhi)37℃溫育30 分(fen)鐘。

4. 配液(ye)：將30 倍濃縮洗滌液(ye)用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小(xiao)心揭掉封板(ban)膜，棄去液體(ti)，甩干(gan)，每孔加滿(man)洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復5 次(ci)，拍干(gan)。

6. 加酶：每孔加入酶標(biao)試劑50μl，空(kong)白孔除外(wai)。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗(xi)滌：操(cao)作同5。

9.  顯(xian)色(se)(se)：每(mei)孔先加入顯(xian)色(se)(se)劑A50μl，再加入顯(xian)色(se)(se)劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避(bi)光顯(xian)色(se)(se)10 分鐘.

10.  終止：每孔加終止液(ye)50μl，終止反應（此(ci)時藍色立(li)轉黃色）。

11.  測定：以(yi)(yi)空白空調零，450nm 波(bo)長依序測量各(ge)孔的(de)(de)吸光度(du)（OD 值）。 測定應(ying)在加終止液后15 分鐘以(yi)(yi)內進行。操作程序總結：計算以(yi)(yi)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)物(wu)的(de)(de)濃度(du)為橫坐標(biao)(biao)(biao)，OD 值為縱坐標(biao)(biao)(biao)，在坐標(biao)(biao)(biao)紙上繪出標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)曲線(xian)，根據樣(yang)品的(de)(de)OD 值由標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)曲線(xian)查出相(xiang)應(ying)的(de)(de)濃度(du)；再乘以(yi)(yi)稀釋(shi)倍(bei)數(shu)；或(huo)用標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)物(wu)的(de)(de)濃度(du)與(yu)OD 值計算出標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)曲線(xian)的(de)(de)直線(xian)回(hui)歸(gui)方(fang)程式(shi)，將樣(yang)品的(de)(de)OD 值代入方(fang)程式(shi)，計算出樣(yang)品濃度(du)，再乘以(yi)(yi)稀釋(shi)倍(bei)數(shu)，即為樣(yang)品的(de)(de)實(shi)際濃度(du)。

注意事項：
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值大于標準品孔*孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本(ben)試劑(ji)不同批(pi)號(hao)組分不得混用。

保(bao)存(cun)條件及有(you)效(xiao)期1．試劑(ji)盒保(bao)存(cun)：；2-8℃。2．有(you)效(xiao)期：6 個月

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