人免疫球蛋白G elisa試劑盒操作中哪部最關鍵

在收集(ji)樣本前都必須有一個(ge)完整的計劃(hua)，必須清楚(chu)要(yao)檢(jian)(jian)測(ce)的成份是(shi)否(fou)足(zu)夠穩定(ding)。對收集(ji)后當天就(jiu)進(jin)行(xing)檢(jian)(jian)測(ce)的樣本，及時儲存在4℃備用(yong)。對于隔天再檢(jian)(jian)測(ce)的樣本，及時分(fen)裝后凍(dong)存在-20℃備用(yong)，有條件的，最好-70℃凍(dong)存備用(yong)。標本應避免(mian)反(fan)復凍(dong)融。

ELISA的(de)(de)(de)(de)基礎是抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)或(huo)(huo)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)的(de)(de)(de)(de)固(gu)相化及抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)或(huo)(huo)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)的(de)(de)(de)(de)酶(mei)標(biao)記。結合在(zai)固(gu)相載體(ti)表面的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)或(huo)(huo)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)仍保(bao)持其(qi)免(mian)疫(yi)學活性(xing)(xing)，酶(mei)標(biao)記的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)或(huo)(huo)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)既(ji)保(bao)留其(qi)免(mian)疫(yi)學活性(xing)(xing)，又保(bao)留酶(mei)的(de)(de)(de)(de)活性(xing)(xing)。在(zai)測定時，受(shou)檢(jian)標(biao)本（測定其(qi)中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)或(huo)(huo)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)）與(yu)固(gu)相載體(ti)表面的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)或(huo)(huo)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)起反(fan)應(ying)(ying)。用洗滌的(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)法使固(gu)相載體(ti)上形成(cheng)的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)復合物(wu)(wu)(wu)(wu)與(yu)液體(ti)中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)其(qi)他物(wu)(wu)(wu)(wu)質(zhi)(zhi)(zhi)分開。再加入酶(mei)標(biao)記的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)或(huo)(huo)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)，也通過反(fan)應(ying)(ying)而結合在(zai)固(gu)相載體(ti)上。此時固(gu)相上的(de)(de)(de)(de)酶(mei)量(liang)(liang)與(yu)標(biao)本中(zhong)(zhong)受(shou)檢(jian)物(wu)(wu)(wu)(wu)質(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)量(liang)(liang)呈一(yi)定的(de)(de)(de)(de)比例。加入酶(mei)反(fan)應(ying)(ying)的(de)(de)(de)(de)底(di)物(wu)(wu)(wu)(wu)后，底(di)物(wu)(wu)(wu)(wu)被酶(mei)催(cui)化成(cheng)為(wei)有(you)色(se)產物(wu)(wu)(wu)(wu)，產物(wu)(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)量(liang)(liang)與(yu)標(biao)本中(zhong)(zhong)受(shou)檢(jian)物(wu)(wu)(wu)(wu)質(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)量(liang)(liang)直接相關，故可根(gen)據呈色(se)的(de)(de)(de)(de)深淺(qian)進(jin)行定性(xing)(xing)或(huo)(huo)定量(liang)(liang)分析。由于酶(mei)的(de)(de)(de)(de)催(cui)化效率很高，間接地放大(da)了免(mian)疫(yi)反(fan)應(ying)(ying)的(de)(de)(de)(de)結果(guo)，使測定方(fang)(fang)法達到很高的(de)(de)(de)(de)敏感度。

操作步驟
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
80ug/ml5 號標準品150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
40ug/ml4 號標準品150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
20ug/ml3 號標準品150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
10ug/ml2 號標準品150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
5ug/ml1 號標(biao)準品(pin)150µl 的 2 號標(biao)準品(pin)加(jia)入 150µl 標(biao)準品(pin)稀釋液

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl， 然后再加待測樣品 10µl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液：將 2 0 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 2 0 倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
 重復 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
     10 分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測(ce)(ce)定：以(yi)空白孔(kong)調零，450nm 波長依序測(ce)(ce)量各孔(kong)的吸(xi)光(guang)度（OD 值）。 測(ce)(ce)定應(ying)在加終止 液后 15 分鐘以(yi)內進行。